Peranan Vitamin C dan Acetosyringone pada Transformasi genetik anggrek Vanda tricolor Lindl. var. suavis melalui Agrobacterium tumefaciens

Abstrak

Vanda tricolor Lindl. var. suavis adalah spesies anggrek alam asli Indonesia yang di habitat asalnya
sudah mulai langka karena kerusakan hutan. Pengembangan metode transfer gen untuk tujuan modifikasi
genetik diperlukan baik untuk perbaikan sifat-sifat tanaman maupun konservasi. Metode transfer gen
melalui Agrobacterium tumefaciens untuk anggrek V. tricolor belum ada protokolnya, sehingga perlu
dikembangkan. Penelitian ini menggunakan protokorm Vanda tricolor Lindl. forma Bali yang berumur
8 minggu setelah semai sebagai target transformasi. T-DNA membawa gen KNAT1 yang dikontrol
oleh promoter CaMV dari Cauliflower Mosaic Virus serta membawa gen NPTII, yakni gen ketahanan
terhadap antibiotik kanamisin untuk seleksi transforman. T-DNA ini dikonstruksi dalam vektor biner
Pgreen dan ditransfer ke genom tanaman melalui A. tumefaciens stranin LBA4404. Deteksi transgen
dilakukan dengan PCR untuk mengamplifikasi fragmen gen KNAT1 sepanjang 1200bp dengan primer
spesifik KNAT1. Tujuan dari penelitian ini adalah: 1) mengetahui peran vitamin C pada transformasi
anggrek V. tricolor dalam mengatasi browning (pencoklatan); 2) menentukan pada tahapan mana
(inokulasi dan atau kokultivasi) acetosyringone perlu ditambahkan dalam proses transformasi; dan 3)
menentukan perlakuan yang menghasilkan persentase kandidat transforman dan frekuensi transformasi
tertinggi. Hasil penelitian mendapatkan bahwa aplikasi vitamin C mencegah terjadinya browning pada
protokorm anggrek V. tricolor yang ditransformasi meningkatkan persentase protokorm hijau setelah
seleksi transforman. Persentase kandidat transforman dan frekuensi transformasi tertinggi diperoleh jika
acetosyringone diaplikasikan pada tahap inokulasi dan kokultivasi, kemudian diberi perlakuan vitamin
C setelah kokultivasi.
Kata kunci: Aggrek V. tricolor, Agrobacterium, Acetosyringone, vitamin C