Optimasi Ekspresi Human Epidermal Growth Factor (h-EGF) Rekombinan dalam Escherichia coli BL21(DE3) dengan Variasi Media dan Konsentrasi Penginduksi

Abstract

Epidermal growth factor (EGF) merupakan protein yang sangat penting dalam proliferasi, diferensiasi, dan pematangan sel. EGF sintetik atau recombinant human EGF (rh-EGF) telah digunakan secara klinis untuk mengatasi kondisi kekurangan EGF alami seperti mempercepat pemulihan luka pada penderita diabetes dan teravaksin untuk pengobatan kanker paru. Ekspresi rh-EGF dilaporkan tidak mudah karena protein ini sensitif terhadap proteolisis intraselular. Kondisi yang optimal sangat diperlukan untukekpsresi rh-EGF agar diperoleh protein dalam jumlah yang tinggi. Hingga saat ini, sejumlah studi ekspresi rh-EGF telah dilaporkan, namun harus difusi dengan protein peningkat solubilitas. Pada penelitian ini, rh-EGF berhasil diekspresikan, meskipun tanpa protein peningkat solubilitas. Ekspresi rh-EGF dikontrol oleh promotor T7 yang tergantung pada isopropil β-D-1-tiogalaktopiranosid (IPTG). Konsentrasi IPTG yang optimal menentukan keberhasilkan ekspresi protein yang diinduksinya. Ekspresi rh-EGF dilakukan dalam dua media, yaitu Luria Bertani (LB) dan Terrific Broth (TB) dengan kondisi non induksi dan induksi IPTG konsentrasi 0,1 mM; 0,5 mM; dan 1 mM. Lama induksi juga divariasikan, yakni 3 dan 6 jam. Konsentrasi rh-EGF tertinggi (0,21 mg/ml) diperoleh dengan ekspresi menggunakan TB yang induksi IPTG 0,5 mM selama 6 jam.